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非洲猪瘟检测方案

更新时间:2023-05-05      浏览次数:423

Ø 1 非洲猪瘟简介

非洲猪瘟(英文名称:African Swine fever,简称:ASF)是由非洲猪瘟病毒(英文名称:African Swine fever virus,简称:ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)引起一种急性、出血性、烈性传染病。非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟科非洲猪瘟病毒属的重要成员,病毒有些特性类似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直径为175-215纳米,呈20面体对称,有囊膜。基因组为双股线状DNA,大小170-190kb。在猪体内,非洲猪瘟病毒可在几种类型的细胞浆中,尤其是网状内皮细胞和单核巨噬细胞中复制。该病毒可在钝缘蜱中增殖,并使其成为主要的传播媒介。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,该病也是我国重点防范的一类动物疫情。

Ø 2 非洲猪瘟在我国的发病情况

2018年8月3日我国确诊非洲猪瘟疫情以来,我国已经在辽宁、安徽、黑龙江、海南等地接连爆发非洲猪瘟疫情。尽管非洲猪瘟传入我国仅年的时间,但已经在多地接连爆发,造成了巨大的经济损失,而且非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似,只能依靠实验室监测确诊。在目前的情况下,急需一种能对非洲猪瘟进行快速检测的方案!

Ø 3 非洲猪瘟病毒(ASFV)实时等温扩增仪配置清单



项目

序号

物品名称

型号规格

单位

数量

备注

1. 

仪器主机

HW-ZW16

1


2. 

仪器使用说明书


1


3. 

合格证/保修卡


2


4. 

仪器电源线


1


5. 

铝合金箱


1


6. 

电子天平

0-500g

1


7. 

样品杯

50mL

24


8. 

移液枪

1-5ml

1


9. 

移液枪枪头

1-5ml

1


10. 

移液枪

100μL-1000μL

1


11. 

移液枪枪头

100μL-1000μL

1


12. 

移液枪

10μL-100μL

1


13. 

移液枪枪头

10μL-100μL

1


14. 

移液枪

2μL-20μL

1


15. 

移液枪枪头

2μL-20μL

1


16. 

剪刀


1


17. 

镊子


1


18. 

研钵

直径8cm

1


19. 

离心机

大龙D1008

1


20. 

离心管

1.5mL

50


21. 

PCR管

0.2mL

50


22. 

非洲猪瘟病毒荧光等温扩增检测试剂

48T/盒

5


23. 

漩涡混匀器


1


24. 

畜牧恒温箱

-10℃~65℃

1


25. 

高速冷冻离心机

LC-LX-HR165A

1


26. 

研磨仪


1


27. 

移液器(5种型号)


10


28. 

冰箱


1



Ø 4 非洲猪瘟病毒(ASFV)实时等温扩增仪技术参数

赤霉素检测仪 

仪器型号

HW-ZW16

样品通量

16x0.2ml,兼容单管和8联管

加热方式

半导体制冷片结合电性电阻热红外技术

温控范围

室温~85℃

温控精度

±0.1℃

温度均一性

±0.15℃

激发光波长

第一通道:470nm±10nm

检测光波长

第一通道:520nm±10nm

激发光

高亮度LED

检测器

新型光学检测器,结合数字电路控制,光信号稳定

荧光传导方式

太空专用光纤传导

结果判读方式

根据扩增曲线软件自动判读阴阳性

结果显示

可在机器显示扩增曲线及出峰时间

检测时间

≤40分钟

检测试剂

开放式恒温荧光检测试剂

操作软件

自带软件

控制方式

触屏控制

检测项目

可同时最多检测16个项目

检测灵敏度

10~109拷贝/反应,且样品间无交叉污染

仪器分析功能

根据所检测样品,直接分析判定阳性或阴性;也可通过标准品进行绝对定量

软件设置功能

可选择反应程序;可对反应程序进行设置,如可设置反应时间、可在反应过程中修改反应时间(缩短或延长)、可设置不同温度,每个温度档位差为0.1℃;可将反应程序保存为模板;可对不同孔进行重命名;可设置扫描间隔时间,范围为 18~60S,默认间隔为 60S;可设置阴阳性判断阈值;阈值线可上下拉动等

工作环境温度

18~35℃

储存温度

-20℃~55℃

环境相对湿度

≤85%

工作电压

100~240V,50~60Hz

 

Ø 5 非洲猪瘟病毒荧光等温扩增检测试剂盒技术参数

作用与用途:用于血液、血球粉、淋巴结、脾脏、扁桃体以及猪肉产品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

1.规格:48次/盒;

2.保存条件:-20℃保存;

3.组成:荧光等温扩增免提取反应液:1100ul;Bst DNA聚合酶:75ul;阴性对照:1000ul;阳性对照:200ul;矿物油:1000ul;说明书:1份;

4.有效期:12个月;

5.本试剂盒适用于便携式荧光定量PCR仪检测箱及各种其他型号荧光定量PCR仪;

6.反应体系:25ul;反应时间:1h;报告基团:FAM;淬灭基团:None;

7.结果判定:有明确判定标准,被检样品荧光信号有指数型增长,阳性对照Tt值≤45并出现典型的扩增曲线,阴性对照无Tt值并且无扩增曲线即S型扩增曲线,结果成立;被检样品Tt值≤45并出现典型的扩增曲线为阳性;被检样品无Tt值并且无典型扩增曲线为阴性;被检样品Tt值在45-60之间并出现典型的扩增曲线为可疑。对于可疑结果应重新检测,如果样品FAM通道仍有典型S型扩增曲线且Tt值≤60,则判定为阳性,否则为阴性;

8.本试剂盒经中国动物疫病预防控制中心评价,诊断敏感性100%,特异性100%;

9.该产品为疫控(诊)【2019】74号文件中推荐的产品;

10. 产品生产厂家具有分子生物学类诊断制品GMP车间。


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